LNA是一种双环结构的碱基,在内环C3位置形成刚性的锁状结构,有利于与RNA形成A型螺旋双螺旋结构。这种特殊的结构赋予LNA与互补的DNA和RNA模板杂交时更强的热稳定性,适用于需要较高的特异性和/或重复性的杂交检测。这类核酸可以增加引物或探针(prabe)的融解温度(Tm值),加强这些实验用物质的稳定性,可应用在即时聚合酶连锁反应(real-timePCR)等技术中。LNA作为一种新颖的核苷酸衍生物在药学研究领域引起了人们的广泛关注,有希望成为分子水平治疗各种疾病的新突破口。它是一种特殊的双环状核苷酸衍生物,与其他寡核苷酸类似物相比,LNA有很多优点:
a.和DNA、RNA互补的双链有很强的热稳定性(Tm=3~8C);
b.抗3'脱氧核普酸酶降解的稳定性:
c.LNADNA杂交物能激活RNaseH:
d.水溶性好,自由穿入细胞膜,易被机体吸收
e.体内无毒性作用:
f.高效的自动寡聚化作用,合成方法相对简单,部分或完全修饰的LNA寡核酸链可用氨基磷酸法在DNA自动合成仪上合成。
LNA的理化特性及优势:
由于LNA独特的性质,表现出更强的结合亲和力、序列特异性、热稳定性和核酸酶抗性。由于在糖结构中连接2'-氧和4'-碳的桥梁,导致 C3'-内切(North 型)构象中的锁核糖基团。2'-0-CH2-4'键将柔性呋喃糖转化为刚性结构,双环结构在 LNA 核苷优异的结合能力中起着至关重要的作用。这种锁定能力使脱核糖的天然结构相对于其他类似物降低了约1-2kcal/mol 的无溶剂能,这是由于2'-OH-CH2-4'键的亲脂性更有利。如果LNA核苷酸存在于寡核苷酸链中,则该寡核苷酸链与互补DNA的结合亲和力增加。将 LNA 插入到寡核苷酸中可以提高杂交链的热稳定性,
LNA在肿瘤诊断与治疗中的应用:
3.1 肺癌:在基因诊断方面,改良的PNA-LNA PCR clamp方法可以预测中晚期肺癌进展,在晚期NSCLC组中,表皮生长因子受体突变的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别为72.7%、100%、100%和93.7%,而T790M的阳性预测值和阴性预测值分别为33.3%和55.6%,该方法体现了高敏感性和高特异性。在治疗方面,采用LNA修饰的靶向TGF-B2的反义寡核苷酸,能够显著降低TGF-B2 mRNA和蛋白质水平而不改变TGF-81和TGE-83的水平,同时对抑制肺损伤生长的肺微环境具有重要作用。
3.2 胃癌:在基因诊断方面,可以使用LNA修饰的原位杂交技术可以预测总生存期,MiR-92a高表达的总生存期较短,而MiR-16和MiR-451高表达的总生存期较长,特别是MiR-16和MiR-451两者同时高表达的患者总生存期更长。在基因治疗方面,miR-NA-9上调可以影响E-钙黏蛋白编码基因的表达,引发置癌细胞运动和侵袭性,设计与miR-NA-9序列互补的、具有抗miRNA的寡核苷酸LNA,即使在低剂量下使
用,也可以快速抑制靶miRNA,并可以通过显著增加LNA水平来影响E-钙黏蛋白的表达。3.3 结肠癌:在基因诊断方面,基于锁核酸修饰探针的方法,通过内部竞争野生抑制型(WTB)探针的扩增片段,阻断EGFR在DNA模板中的扩增,大大增加结直肠癌的检测率,有助于在单一分子水平上检测突变的等位基因。在基因治疗方面,使用LNA修饰探针可以抑制人结直肠癌细胞系的SW48细胞中的miR.92A-3P基因,透导结直肠癌坏死,通过LNA外理LS174T细胞,可以显著抑制miR-21表达,并使BM11的蛋白质表达上调,加速肿瘤细胞凋零。
3.4 肝癌:在基因诊断方面,通过使用LNA修饰的探针可以检测miR-181a-5p水平,预测总体存活率。在基因治疗方面,LNA通过抑制肝细胞癌中B-连环蛋白,抑制肿瘤细胞增殖促进凋亡。
产品优势:
所有LNA生产均在无菌万级GMP实验室中完成:
所有LNA以及修饰物均提供HPLC及以上等级的纯化
所有LNA以及修饰物均提供Mass+HPLC检测报告
最长可合成150碱基的LNA,ng-kg的交付能力,400+种修饰。
多种纯化方式、多种LNA标记、多种合成规模、多种交付形式,便于用户灵活选择。
货 号 | 合成碱基 | 摩尔浓度 | 合成规格 | 纯化方式 | 发货状态 | 包装 |
NKT-LC001 | 3mer-150mer | 0.1nmol~1000mmol | 1ng-1kg | DSL | 干粉or液体 | 单管、96孔板、384孔板 |
NKT-LC002 | 3mer-150mer | 0.1nmol~1000mmol | 1ng-1kg | OPC | 干粉or液体 | 单管、96孔板、384孔板 |
NKT-LC003 | 3mer-150mer | 0.1nmol~1000mmol | 1ng-1kg | PAGE | 干粉or液体 | 单管、96孔板、384孔板 |
NKT-LC004 | 3mer-150mer | 0.1nmol~1000mmol | 1ng-1kg | ETTPur | 干粉or液体 | 单管、96孔板、384孔板 |
NKT-LC005 | 3mer-150mer | 0.1nmol~1000mmol | 1ng-1kg | HPLC | 干粉or液体 | 单管、96孔板、384孔板 |
NKT-LC006 | 3mer-150mer | 0.1nmol~1000mmol | 1ng-1kg | DHPLC | 干粉or液体 | 单管、96孔板、384孔板 |
★LNA基础收费标准按照单个碱基计算
★LNA价格=(碱基价格*碱基)+纯化费用(HPLC免费)+修饰费用(可选)
★具体价格体系请咨询当地业务员或经销商